药物筛选与non-GLP毒理评价

体外药物筛选

一、生化水平测试与早期筛选

激酶、代谢酶、表观遗传酶类的活性测定
蛋白、受体/配体、离子通道的分子间相互作用及结合力测定
化合物筛选


分析技术平台

PHERAstar FSX高通量超灵敏HTS多功能酶标仪

PHERAstar FSX高通量超灵敏HTS多功能酶标仪

检验模式:

荧光强度,包括FRET
荧光偏振
AlphaScreen®/AlphaLISA®

发光,包括BRET、 Kinase Glo
时间分辨荧光-包括TR-FRET
UV/Vis吸收光谱
ELISA


激酶筛选模型清单

Tyrosine Kinases

Serine / Threonine Kinases

ABL   (ABL1)

EGFR   [T790M]

LTK

AKT1

IRAK4

PIM1

ABL   [E255K]

FER

LYNa

AKT2

JNK2(MAPK9)

PIM2

ABL   [G250E]

FES

MUSK

AKT3

JNK3   (MAPK10)

PKACα   (PRKACA)

ABL   [T315I]

FGFR1

PDGFRα   (PDGFRA)

AMPKα1(PRKAA1)

MAP4K2

PKCα   (PRKCA)

ABL   [Y253F]

FGFR2

PDGFRβ   (PDGFRB)

AUR   A (AURKA)

MAP4K4

PKCβ1   (PRKCB1)

ALK

FGFR3

RAF1

AUR   B (AURKB)

MAPKAPK2

PKCβ2   (PRKCB2)

ALK   [C1156Y]

FGFR4

RET

AUR   C (AURKC)

MAPKAPK3

PKCγ   (PRKCG)

ARG   (ABL2)

FGR

RON   (MST1R)

BRAF

MAPKAPK5

PKCδ   (PRKCD)

AXL

FLT3

ROS   (ROS1)

BRAF[V599E]

MARK1

PKCε   (PRKCE)

BLK

FYN   [isoform a]

SRC

CaMK2α(CAMK2A)

MARK2

PKCζ   (PRKCZ)

BRK   (PTK6)

FYN   [isoform b]

SYK

CaMK2β(CAMK2B)

MARK3

PKCη   (PRKCH)

BTK

HCK

TIE2   (TEK)

CaMK2γ   (CAMK2G)

MASK

PKCθ   (PRKCQ)

CDK4/Cyclin

HER2   (ERBB2)

TRKA   (NTRK1)

CaMK2δ   (CAMK2D)

MINK   (MINK1)

PKCι   (PRKCI)

CDK6/Cyclin

HER4   (ERBB4)

TRKA   (NTRK1)

CaMK4

MSK1   (RPS6KA5)

PKD1   (PRKD1)

CDK9/Cyclin

IGF1R

TYK2

CDC2

MSK2   (RPS6KA4)

PKD2   (PRKD2)

cKIT

INSR

VEGFR1   (FLT1)

CHK1(CHEK1)

MST1 (STK4)

PKD3   (PRKD3)

cMET

ITK

VEGFR2   (KDR)

CHK2(CHEK2)

MST2 (STK3)

ROCK1

CSK

JAK1

VEGFR3   (FLT4)

CK1δ   (CSNK1D)

MYLK2

ROCK2

ECK/EphA2

JAK2

YES   (YES1)

CK1ε   (CSNK1E)

NEK2

RSK1   (RPS6KA1)

EGFR   (ERBB1)

JAK3

ZAP70

DCAMKL2

p38α   (MAPK14)

RSK2   (RPS6KA3)

EGFR   [L858R]

LCK

DYRK1A

p38β   (MAPK11)

RSK3   (RPS6KA2)

DYRK1B

p38γ   (MAPK12)

SGK

Erk1   (MAPK3)

p38δ   (MAPK13)

SGK2

Erk2(MAPK1)

p70S6K   (RPS6KB1)

SGK3   (SGKL)

GSK3α   (GSK3A)

PAK4

TAOK2

GSK3β(GSK3B)

PDHK1   (PDK1)

IKKβ   (IKBKB)

PGK   (PRKG1)


基于HTRF技术的药物-激酶活性测定

图1. 基于HTRF技术的药物-激酶活性测定


二、细胞水平测试与药物筛选

细胞水平功能性检测平台

敏感细胞株筛选

周期测定、增殖、毒性和凋亡测定

迁移和侵袭、细胞摄取分析

细胞因子诱导检测

药物作用机制及信号通路研究

免疫荧光(IF)

免疫组化(IHC)

酶联免疫(ELISA)

Western Blot

qPCR

RT-PCR

HTRF细胞水平检测分析

AlphaScreen

Alphalisa

流式细胞术(FACS)


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